Продавець ТОВ УКРВЕТ розвиває свій бізнес на Prom.ua 14 років.
Знак PRO означає, що продавець користується одним з платних пакетів послуг Prom.ua з розширеними функціональними можливостями.
Порівняти можливості діючих пакетів
Кошик
295 відгуків
Ветеринарне обладнання та інструменти | Обладнання для тваринництва і птахівництва
Контакти
ТОВ УКРВЕТ
ул. Сеченова 7А, 03127, Київ, Україна
+380 (93) 426-45-45
+380 (67) 426-45-45
+380 (50) 426-45-45
+380 (96) 426-45-45
Мапа
+380 (93) 426-45-45
+380 (67) 426-45-45
+380 (50) 426-45-45

Раннє виявлення АЧС

Раннє виявлення АЧС

Раннє виявлення АЧС

Очевидно, що раннє виявлення – найкраще рішення у справі захисту здоров'я тварин, при цьому воно являє собою найбільш складну складову будь ефективно діючої системи нагляду за хворобою. Наукові досягнення останніх десятиліть дозволили розробку методів лабораторної діагностики, які не тільки володіють високою чутливістю і специфічністю, але і швидких в здійсненні. Більшість національних і міжнародних Довідкових лабораторій має методами, що дозволяють ставити точний діагноз всього за кілька годин. Між тим, час, необхідний для виявлення хвороби на місці або принаймні виявлення підозри на неї – представляє поки основну трудність. Дійсно, склалася ситуація, коли добре відомі хвороби, такі як ящур, класична чума свиней або катаральна лихоманка овець можуть циркулювати в багатьох країнах протягом декількох тижнів і навіть місяців, не викликаючи жодних підозр, при цьому ні одна проба не відправляється в лабораторію на диференціальне дослідження. У деяких випадках причина тому – нетипова форма хвороби в країнах, які були щасливі і не припускали саму можливість занесення інфекції. В інших випадках це пояснювалося несподіваною появою хвороби у тих видів тварин, які показують мало клінічних ознак, а також це могло бути наслідком погано продуманих програм нагляду. Причиною затримки раннього виявлення АЧС можуть стати різні фактори, які можна згрупувати наступним чином:

  • Непоінформованість населення або недооцінка ризику занесення хвороби (імовірності поширення збудника)
  • Погане знайомство з хворобою, особливостями діагностики та клінічними та патологічними змінами
  • Невірні діагностичні та епідеміологічні процедури; неготовність обладнання на місцях
  • Аналіз зразків не відповідає рівню ризику
  • Лабораторні помилки

Отже, не буде зайвим нагадати, що оперативна та ефективна постановка діагнозу дозволяє стримати поширення інфекції і без зволікань звернутися до заходів боротьби, бо ці фактори більш інших важливі для еволюції хвороби і вирішення проблеми. Також важливо нагадати, що для оперативної постановки діагнозу: по-перше, має бути підозра на хворобу на місці; по-друге, на лабораторне дослідження повинні надходити якісні зразки; і, по-третє, необхідно продумати найбільш відповідні профілактичні заходи. Раннє виявлення хвороби отже залежить від досягнення оптимальної рівноваги між наглядом на місці, можливостями лабораторії і профілактичними заходами.

Для забезпечення належного нагляду на місці необхідно насамперед привернути увагу ветеринарів і тваринників до ризику занесення цієї хвороби і до обов'язковості повідомлення про будь-які підозри на неї. Тому першочергове захід у цьому ареалі полягає в інформуванні ветеринарів (державних і приватних) і тваринників про наявну загрозу та основні характеристики хвороби, і у їх навчанні. Інформування повинно вестися, насамперед, з питань можливих шляхів занесення хвороби, симптоматики та можливих патологічних змін, що виникають в результаті зараження, при цьому з особливим акцентом на необхідності відправки проб в лабораторію для постановки правильного діагнозу.

Проби до відправки в лабораторію у разі підозри на АЧС:

  • Кров на антикоагулянте (EDTA)
  • Сироватка
  • Селезінка
  • Легке
  • Нирка
  • Лімфатичні вузли

З причини великої різноманітності симптомів і патологічних змін, що можуть виникнути внаслідок зараження вірусом африканської чуми свиней, і їх подібності з симптоматикою і поразками при інших свинячих геморагічних хворобах, лабораторна діагностика у випадку з АЧС набуває ключову роль. В загрозливих зонах будь відмінок серед свиней, які показували геморагічну лихоманку, повинен ставати предметом розслідування.

Диференціальну діагностику проводять за наступними хворобами:

  • Класична чума свиней
  • Сальмонельоз
  • Бешихове запалення
  • Гострий пастерельоз
  • Стрептококова інфекція
  • Хвороба Ауєскі
  • Лептоспіроз
  • Інфекція цирковирусами
  • Дерматозный і нефропатический синдром свиней (PDNS) і мультисистемний послеотъемный синдром виснаження (PMWS)
  • Отруєння кумарином

Друга міра полягає в озброєнні ефективними методами лабораторної діагностики. Сьогодні є багато діагностичних методів різного типу: вірусологічний (виявлення вірусу і вірусних протеїнів), молекулярний (виявлення вірусної ДНК) і серологічний (на антитіла) (Табл. 1). Керівництво по діагностичних тестів і вакцин для наземних тварин (Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals) докладно описує діагностичні протоколи.

Табл. 1.– Методи лабораторної діагностики АЧС

Виявлення вірусу

Характеристики

Реакція гемадсорбции (РГАд)

Вірус АЧС виділяють на первинних макрофаговых культурах свиней. ВАЧС здатний викликати інфекцію і самореплицироваться природним шляхом в культурах лейкоцитів периферійної крові свиней, де він провокує не тільки цитопатический ефект на заражених макрофагах, але і характерний гемадсорбционый ефект (РГАд) до клітинного лізису. Під мікроскопом вірус має вигляд розеток червоних кров'яних тілець, фіксуючих на лейкоцитах. Техніка гемадсорбции залишається найбільш специфічним і високочутливим методом ідентифікації ВАЧС, так як жоден з інших свинячих вірусів такого ефекту не дає. Хоча гемадсорбция вимагає часу і великих трудовитрат порівняно з іншими методами діагностики (отримання результатів вимагає 5-10 днів), проте він залишається кращою технікою перед іншими, більш швидкими методами діагностики. Важливо відзначити, що деякі штами ВАЧС не гемадсорбируют. У цьому випадку для підтвердження присутності вірусу звертаються до додаткових аналізів клітинного осаду за допомогою ПЛР або імунофлуоресценції.

Техніка РГАд використовується в даний час тільки в декількох Довідкових лабораторіях. РГАд вимагає 3-10 днів.

Реакція імуно - флуоресценції (РІФ)

Техніка імунофлуоресценції ґрунтується на виявленні вірусних антигенів у відповідь на фарбування зрізів, приготованих в криостате, або калькування тканин з анти-АЧС з додаванням флуоресцентного изотиоцината (FITC). Це дуже простий, швидкий і чутливий метод, який також може застосовуватися у випадку з клітинними культурами, зараженими пульпою з органів і тканин від підозрюваних на хворобу свиней. Під мікроскопом заражені клітини показують цитоплазмические включення, що випускають сильне світіння. При інфекції на просунутій стадії специфічне світіння може прийняти зернистий вигляд. Якщо інфекція датується більш ніж 10 днями, коли з'являються антитіла, вони можуть заблокувати взаємодія з коньюгатом, що дає псевдонегативний результат. З цієї причини РИФ використовують паралельно з досвідом на виявлення антитіл (непряма иммунофлуоресценция, ІФА, імуноблотинг).

Рекомендується використовувати техніку РИФ тільки тоді, коли відсутня можливість постановки ПЛР або коли досвід її постановки ще не напрацьовано. Не слід забувати, що будь-який негативний результат повинен підтверджуватися, для чого рекомендується паралельно здійснювати тест на виявлення антитіл. РИФ вимагає 75 хвилин

Полимеразоцепная реакція (ПЛР)

ПЛР – високочутлива і специфічна техніка, яка дозволяє підтвердити присутність вірусу шляхом амплицикации вірусної ДНК, що міститься в пробі. Техніка ПЛР використовують приманки, відповідні добре сохраняющемуся ділянки геному, що дозволяє виявляти більшу частину відомих штамів ВАЧС, як гемадсорбирующих, так і не гемадсорбирующих. Ця техніка в даний час використовується Довідковими лабораторіями для постановки вірусологічного підтвердження діагнозу і присутності АЧС. Вона може застосовуватися як до пробам тканини, так і серопробам, узятих у тварин з клінічними ознаками хвороби, оскільки триває віремія. Отже, техніка ПЛР може використовуватися для виявлення присутності вірусу в крові з другого дня інфекції і до декількох тижнів

В даний час ПЛР – широко використовувана техніка для цілей етіологічної діагностики, однак вона вимагає доброї підготовленості лабораторних фахівців. ПЛР вимагає від 5 до 6 годин

Імуно - ферментний аналіз (ІФА)

Для діагностики АЧС також були адаптовані такі методи, як ІФА-сендвіч (ELISA sandwich) і імуноблотинг. Однак вони використовуються рідше, так як, незважаючи на свою підвищену чутливість на ранній стадії інфекції, вона сильно падає через 9-10 днів після початку інфекції. Це пояснюється тим, що відбувається блокування антитілами, як було зазначено вище, у випадку з РИФ.

Широкого використання ІФА не набула. Ця техніка займає 3 години

 
Виявлення антитіл Характеристики  
Реакція непрямої иммунофлуо - ресценции (РНІФ РНІФ ― швидка техніка, показує високу чутливість і специфічність, при якій відбувається реакція специфічних антитіл, присутніх в сироватці або эксудате на клітинному покриві, заражений вірусом АЧС. Реакція проявляється при додаванні иодо-протеїну A або флуоресцентний міченого другого антитіла Анти-IgG свині. Якщо клітинний шар містить позитивні зразки на ділянках, близьких до ядра, спостерігається світіння, яке відповідає точкам реплікації ВАЧС Техніка РНІФ дуже мало використовується в даний час. Реактиви в торгівлі відсутні. Ця техніка вимагає 2 годин
Імуно - ферментний аналіз (ІФА) ІФА ― метод, використовуваний для масових профілактичних і епізоотичних досліджень. До застосовуваної в даний час техніці ІФА використовують розчинний антиген, що містить більшу частину вірусних протеїнів АЧС. ІФА – високочутливий і специфічний, швидкий, легкий і низьковитратний метод. Нещодавно був розроблений новий метод ІФА з неінфікованими реактивами, в якому в якості вірусних антигенів застосовуються рекомбінантні білки p32, p54 і pp62. Тестування за допомогою ІФА демонструє рівну або більш високу чутливість і специфічність, що дозволяють досліджувати погано збереглася сироватку. ІФА – техніка, широко використовувана в даний час. У продажу є діагностичні набори для постановки цього тесту. ІФА вимагає 2 годин
Імуноблотинг Імуноблотинг – иммуноэнзиматическая техніка, при якій вірусні протеїни АЧС переносять на нітроцелюлозні фільтри, що виконують функцію антигенних смуг, на яких відбувається реакція підозрілої сироватки з допомогою коньюктивата протеїну A / пероксидази для виявлення специфічних антитіл. Техніка імуноблотинг а використовується для визначення реактивності антитіл, присутніх в сироватці при контакті з різними протеїнами, специфічно виробленими вірусом африканської чуми свиней. Специфічність, а також висока чутливість і об'єктивний характер імуноблотінгу роблять його ідеальною технікою серологічної діагностики для підтвердження наявності АЧС. Діагностичні набори для цієї техніки у продажу відсутні. Реактиви виробляються в деяких Довідкових лабораторіях Європейського союзу і МЕБ. Імуноблотинг – чудова техніка для серологічного підтвердження в разі сумніву. Ця техніка вимагає 3 годин.

В Табл. 1 узагальнено методи, що використовуються в даний час для цілей діагностики АЧС, наведено їх переваги та недоліки, а також відзначені ті з них, що є рекомендованими. Загальним порядком при першому обстеженні рекомендується звертатися не більш ніж до однієї техніці діагностики. Найбільш часто використовуваними сьогодні методами є: ПЛР з подальшим сиквенированием та ІФА або імуноблотинг. При відсутності можливості постановки ПЛР слід паралельно провести иммунофлуоресценцию і тест на виявлення антитіл. У будь-якому випадку слід завжди ставити тести паралельно, що дозволяє одночасне виявлення вірусу і антитіл. Вірус АЧС володіє сильною антигенностью, виробляючи значна кількість нейтралізуючих антитіл, які можна виявити через 7-10 днів після зараження і які зберігаються протягом місяців. Більше того, так як вакцини проти АЧС не існує, присутність антитіл завжди є надійним свідченням інфекції. Нарешті, слід нагадати, що в разі звернення до таких методів як иммунофлуоресценция або прямий ІФА для виявлення вірусних антигенів, антитіла тварин можуть блокувати взаємодію з коньюгатом, даючи хибно - негативні результати. Крім того, одночасне використання декількох методів виявлення антигенів і антитіл дозволяє розрахувати термін інфекції. Виявлення антигенів за відсутності антитіл може свідчити про інфекцію менше 10-12 днів. Ідентифікація антитіл може дозволити також ідентифікувати тварин-носіїв, так як вони часто спостерігаються при тривалих інфекціях АЧС. 

На нашому сайті Ви можете замовити Набір для виявлення антитіл до вірусу африканської чуми свиней імуноферментним методом INGEZIM PPA COMPAC

Інші статті

Наскільки вам зручно на сайті?

Розповісти Feedback form banner