Корзина
Категории
Оборудование для свиноводства
Оборудование для скотоводства
+380
93
426-45-45
+380
96
426-45-45
+380
50
426-45-45
+380
68
454-11-22
+380
44
502-55-45
ТОВ "УКРВЕТ"
ТОВ "УКРВЕТ"
03127УкраинаКиевул. Сеченова, 7А
Карта
Раннее обнаружение АЧС

Раннее обнаружение АЧС

Раннее обнаружение АЧС
Большинство национальных и международных Справочных лабораторий располагает методами, позволяющими ставить точный диагноз всего за несколько часов.

13.11.15

Раннее обнаружение АЧС

Очевидно, что раннее выявление – наилучшее решение в деле защиты здоровья животных, при этом оно представляет собой наиболее сложную составляющую любой эффективно действующей системы надзора за болезнью. Научные достижения последних десятилетий позволили разработку методов лабораторной диагностики, не только обладающих высокой чувствительностью и специфичностью, но и быстрых в осуществлении. Большинство национальных и международных Справочных лабораторий располагает методами, позволяющими ставить точный диагноз всего за несколько часов. Между тем, время, необходимое для обнаружения болезни на месте или по крайней мере выявления подозрения на нее – представляет пока основную трудность. Действительно, сложилась ситуация, когда хорошо известные болезни, такие как ящур, классическая чума свиней или катаральная лихорадка овец могут циркулировать во многих странах в течение нескольких недель и даже месяцев, не вызывая никаких подозрений, при этом ни одна проба не отправляется в лабораторию на дифференциальное исследование. В некоторых случаях причина тому – нетипичная форма болезни в странах, которые были благополучны и не предполагали саму возможность заноса инфекции. В других случаях это объяснялось неожиданным появлением болезни у тех видов животных, которые показывают мало клинических признаков, а также это могло явиться следствием плохо продуманных программ надзора. Причиной задержки раннего выявления АЧС могут стать различные факторы, которые можно сгруппировать следующим образом:

  • Неинформированность населения или недооценка риска заноса болезни (вероятности распространения    возбудителя)
  • Плохое знакомство с болезнью, особенностями диагностики и клиническими и патологическими изменениями
  • Неверные диагностические и эпидемиологические процедуры; неготовность оборудования на местах     
  • Анализ образцов, не соответствующий уровню риска
  • Лабораторные ошибки

Следовательно, не будет лишним напомнить, что оперативная и эффективная постановка диагноза позволяет сдержать распространение инфекции и без промедления обратиться к мерам борьбы, ибо эти факторы более других важны для эволюции болезни и решения проблемы. Также важно напомнить, что для оперативной постановки диагноза: во-первых, должно иметься подозрение на болезнь на месте; во-вторых, на лабораторное исследование должны поступать качественные образцы; и, в-третьих, необходимо продумать наиболее подходящие профилактические меры. Раннее выявление болезни следовательно зависит от достижения оптимального равновесия между надзором на месте, возможностями лаборатории и профилактическими мерами.

Для обеспечения надлежащего надзора на месте необходимо прежде всего привлечь внимание ветеринаров и животноводов к риску заноса данной болезни и к обязательности сообщения о любых подозрениях на нее. Поэтому первоочередная мера в этом ареале заключается в информировании ветеринаров (государственных и частных) и животноводов об имеющейся угрозе и основных характеристиках болезни, и в их обучении. Информирование должно вестись, прежде всего, по вопросам возможных путей заноса болезни, симптоматики и возможных патологических изменений, возникающих в результате заражения, при этом с особым акцентом на необходимости отправки проб в лабораторию для постановки правильного диагноза.

 Пробы к отправке в лабораторию в случае подозрения на АЧС:

  • Кровь на антикоагулянте (EDTA)
  • Сыворотка
  • Селезенка
  • Легкое
  • Почка
  • Лимфатические узлы

По причине большого разнообразия симптомов и патологических изменений, могущих возникнуть вследствие заражения вирусом африканской чумы свиней, и их сходства с симптоматикой и поражениями при других свиных геморрагических болезнях, лабораторная диагностика в случае с АЧС приобретает ключевую роль. В угрожаемых зонах любой падеж среди свиней, показывавших геморрагическую лихорадку, должен становиться предметом расследования.

Дифференциальную диагностику проводят по следующим болезням:

  • Классическая чума свиней
  • Сальмонеллез
  • Рожистое воспаление
  • Острый пастереллез
  • Стрептококковая инфекция
  • Болезнь Ауески
  • Лептоспироз
  • Инфекция цирковирусами
  • Дерматозный и нефропатический синдром свиней (PDNS) и мультисистемный послеотъемный синдром истощения (PMWS)
  • Отравление кумарином

Вторая мера состоит в вооружении эффективными методами лабораторной диагностики. Сегодня имеется много диагностических методов разного типа: вирусологический (выявление вируса и вирусных протеинов), молекулярный (выявление вирусной ДНК) и серологический (на антитела) (Табл. 1). Руководство по диагностическим тестам и вакцинам для наземных животных (Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals) подробно описывает диагностические протоколы. 

Табл. 1.– Методы лабораторной диагностики АЧС

Выявление вируса

Характеристики

Реакция гемадсорбции (РГАд) 

Вирус АЧС выделяют на первичных макрофаговых культурах свиней. ВАЧС способен вызывать инфекцию и самореплицироваться естественным путем в культурах лейкоцитов периферийной крови свиней, где он провоцирует не только цитопатический эффект на зараженных макрофагах, но и характерный гемадсорбционый эффект (РГАд) до клеточного лизиса. Под микроскопом вирус имеет вид розеток красных кровяных телец, фиксирующихся на лейкоцитах. Техника гемадсорбции остается наиболее специфическим и высокочувствительным методом идентификации ВАЧС, так как ни один из других свиных вирусов такого эффекта не дает. Хотя гемадсорбция требует времени и больших трудозатрат сравнительно с другими методами диагностики (получение результатов требует 5-10 дней), тем не менее он остается предпочтительной техникой перед другими, более скорыми методами диагностики. Важно отметить, что некоторые штаммы ВАЧС не гемадсорбируют. В этом случае для подтверждения присутствия вируса обращаются к дополнительным анализам клеточного осадка посредством ПЦР или иммунофлуоресценции.

Техника РГАд используется в настоящее время только в нескольких Справочных лабораториях. РГАд требует 3-10 дней.

Реакция иммуно- флуоресценции (РИФ)

Техника иммунофлуоресценции основывается на выявлении вирусных антигенов в ответ на окрашивание срезов, приготовленных в криостате, или калькирования тканей с анти-АЧС с добавлением флуоресцентного изотиоцината (FITC). Это очень простой, быстрый и чувствительный метод, который также может применяться в случае с клеточными культурами, зараженными пульпой из органов и тканей от подозреваемых на болезнь свиней. Под микроскопом зараженные клетки показывают цитоплазмические включения, испускающие сильное свечение. При инфекции на продвинутой стадии специфическое свечение может принять зернистый вид. Если инфекция датируется более чем 10 днями, когда появляются антитела, они могут заблокировать взаимодействие с коньюгатом, что дает ложноотрицательный результат. По этой причине РИФ используют параллельно с опытом на выявление антител (непрямая иммунофлуоресценция, ИФА, иммуноблоттинг).

Рекомендуется использовать технику РИФ только тогда, когда отсутствует возможность постановки ПЦР или когда опыт ее постановки еще не наработан. Не следует забывать, что любой отрицательный результат должен подтверждаться, для чего рекомендуется параллельно осуществлять тест на выявление антител. РИФ требует 75 минут

Полимеразоцепная реакция (ПЦР)

ПЦР – высокочувствительная и специфическая техника, которая позволяет подтвердить присутствие вируса путем амплицикации вирусной ДНК, содержащейся в пробе. Техника ПЦР использует затравки, соответствующие хорошо сохраняющемуся участку генома, что позволяет обнаруживать большую часть известных штаммов ВАЧС, как гемадсорбирующих, так и не гемадсорбирующих. Эта техника в настоящее время используется Справочными лабораториями для постановки вирусологического диагноза и подтверждения присутствия АЧС. Она может применяться как к пробам ткани, так и серопробам, взятых у животных с клиническими признаками болезни, поскольку продолжается виремия. Следовательно, техника ПЦР может использоваться для выявления присутствия вируса в крови со второго дня инфекции и до нескольких недель

В настоящее время ПЦР – широко используемая техника для целей этиологической диагностики, однако она требует хорошей подготовленности лабораторных специалистов. ПЦР требует от 5 до 6 часов

Иммуно- ферментный анализ (ИФА)

Для диагностики АЧС также были адаптированы такие методы, как ИФА-сендвич (ELISA sandwich) и иммуноблоттинг. Однако они используются реже, так как, несмотря на свою повышенную чувствительность на ранней стадии инфекции, она сильно падает через 9-10 дней после начала инфекции. Это объясняется тем, что происходит блокировка антителами, как то было указано выше в случае с РИФ.

Широкого использования ИФА не приобрела. Эта техника занимает 3 часа

 
Выявление антител Характеристики  
Реакция непрямой иммунофлуо- ресценции (РНИФ РНИФ ― быстрая техника, показывающая высокую чувствительность и специфичность, при которой происходит реакция специфических антител, присутствующих в сыворотке или эксудате на клеточном покрове, зараженном вирусом АЧС. Реакция проявляется при добавлении иодо-протеина A или флуоресцентно меченного второго антитела Anti-IgG свиньи. Если клеточный слой содержит положительные образцы на участках, близких к ядру, наблюдается свечение, которое соответствует точкам репликации ВАЧС Техника РНИФ очень мало используется в настоящее время. Реактивы в торговле отсутствуют. Эта техника требует 2 часов
Иммуно- ферментный анализ (ИФА) ИФА ― метод, используемый для массовых профилактических и эпизоотических исследований. В применяемой в настоящее время технике ИФА используют растворимый антиген, содержащий большую часть вирусных протеинов АЧС. ИФА – высокочувствительный и специфический, скорый, легкий и низкозатратный метод. Недавно был разработан новый метод ИФА с неинфицированными реактивами, в котором в качестве вирусных антигенов применяются рекомбинантные протеины p32, p54 и pp62. Тестирование с помощью ИФА демонстрирует равное или более высокую чувствительность и специфичность, позволяющие исследовать плохо сохранившуюся сыворотку. ИФА – техника, широко используемая в настоящее время. В продаже имеются диагностические наборы для постановки этого теста. ИФА требует 2 часов
Иммуноблоттинг Иммуноблоттинг – иммуноэнзиматическая техника, при которой вирусные протеины АЧС переносят на нитроцеллюлозные фильтры, выполняющие функцию антигенных полос, на которых происходит реакция подозрительной сыворотки с помощью коньюктивата протеина A / пероксидазы для выявления специфических антител. Техника иммуноблоттинг а используется для определения реактивности антител, присутствующих в сыворотке при контакте с различными протеинами, специфически производимыми вирусом африканской чумы свиней. Специфичность, а также высокая чувствительность и объективный характер иммуноблоттинга делают его идеальной техникой серологической диагностики для подтверждения наличия АЧС. Диагностические наборы для этой техники в продаже отсутствуют. Реактивы производятся в некоторых Справочных лабораториях Европейского союза и МЭБ. Иммуноблоттинг – превосходная техника для серологического подтверждения в случае сомнения. Эта техника требует 3 часов.

В Табл. 1 обобщены методы, используемые в настоящее время для целей диагностики АЧС, описаны их преимущества и недостатки, а также отмечены те из них, что являются рекомендуемыми. Общим порядком при первом обследовании рекомендуется обращаться более чем к одной технике диагностики. Наиболее часто используемыми сегодня методами являются: ПЦР с последующим сиквенированием и ИФА или иммуноблоттинг. При отсутствии возможности постановки ПЦР следует параллельно провести иммунофлуоресценцию и тест на выявление антител. В любом случае следует всегда ставить тесты параллельно, что позволяет одновременное обнаружение вируса и антител. Вирус АЧС обладает сильной антигенностью, производя  значительное количество нейтрализующих антител, которые можно обнаружить через 7-10 дней после заражения и которые сохраняются в течение месяцев. Более того, так как вакцины против АЧС не существует, присутствие антител всегда является надежным свидетельством инфекции. Наконец, следует напомнить, что в случае обращения к таким методам как иммунофлуоресценция или прямой ИФА для выявления вирусных антигенов, антитела животных могут блокировать взаимодействие с коньюгатом, давая ложно- отрицательные результаты. Кроме того, сочетанное использование нескольких методов выявления антигенов и антител позволяет рассчитать срок инфекции. Обнаружение антигенов при отсутствии антител может свидетельствовать об инфекции менее 10-12 дней. Идентификация антител может позволить также идентифицировать животных-носителей, так как они часто наблюдаются при длительных инфекциях АЧС. 

На нашем сайте Вы можете заказать Набор для выявления антител к вирусу африканской чумы свиней иммуноферментным методом INGEZIM PPA COMPAC

Источник: Хосе Мануэл Санчес-Вискайно Справочная лаборатория МЭБ по африканской чуме

Предыдущие статьи
  • 20.10.15 Африканская чума свиней (АЧС)
    Африканская чума свиней (АЧС)

    Африканская чума свиней (АЧС) ― опасная инфекционная болезнь свиней, характеризующаяся лихорадкой, воспалительными и дистрофическими поражениями внутренних органов, многочисленными кровоизлияниями и высокой смертностью.

    Полная версия статьи